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目的 本研究擬建立一種靈敏快速的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(real?time quantitative PCR， qPCR)方法，用 于檢測(cè)大、小鼠木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus， S. xylosus)。>>>商務(wù)洽談，點(diǎn)此處，在線咨詢

方法 本研究選擇特異性 gehM 基因片段作為靶 標(biāo)合成了一套引物，建立了木糖葡萄球菌檢測(cè)的 qPCR 方法。 對(duì)木糖葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株和其他非目標(biāo)菌進(jìn)行特異 性分析。 將木糖葡萄球菌的 DNA 進(jìn)行 10 倍稀釋測(cè)定其靈敏度。 用送檢的樣本進(jìn)行了臨床應(yīng)用并測(cè)序驗(yàn)證，同時(shí) 與培養(yǎng)法進(jìn)行比較。

結(jié)果 僅木糖葡萄球菌出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，而其他非目標(biāo)菌未出現(xiàn)，表明設(shè)計(jì)的引物對(duì)木 糖葡萄球菌具有特異性，靈敏度為 100 fg / μL，組內(nèi)和組間重復(fù)性均小于 3%。 共檢測(cè) 60 份臨床樣品，有 5 份樣品擴(kuò) 增曲線為典型的 S 曲線，將該 qPCR 產(chǎn)物克隆測(cè)序并進(jìn)行同源性比對(duì)，該序列與木糖葡萄球菌的同源性為 99.63%， 表明該樣本木糖葡萄球菌核酸陽性，所檢測(cè)樣本陽性率為 8.3%，而培養(yǎng)法的陽性率為 6.7%，qPCR 方法陽性檢出 率比培養(yǎng)法略高。

結(jié)論 建立的木糖葡萄球菌 qPCR 方法，具有快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)和重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，可用 于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物木糖葡萄球菌的檢測(cè)。

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